హిమోగ్లోబిన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ప్రయోగం

ప్రయోగ సూత్రం

హేమోగ్లోబిన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ వివిధ సాధారణ మరియు అసాధారణమైన హిమోగ్లోబిన్‌లను గుర్తించడం మరియు నిర్ధారించడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది.

వివిధ రకాల హిమోగ్లోబిన్ రకాలకు చెందిన విభిన్న ఛార్జీలు మరియు ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ల కారణంగా, ఒక నిర్దిష్ట pH బఫర్ ద్రావణంలో, హిమోగ్లోబిన్ యొక్క ఐసోఎలెక్ట్రిక్ పాయింట్ బఫర్ ద్రావణం యొక్క pH కంటే తక్కువగా ఉన్నప్పుడు, హిమోగ్లోబిన్ ప్రతికూల చార్జ్‌ను కలిగి ఉంటుంది మరియు ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయంలో యానోడ్ వైపుకు మారుతుంది. దీనికి విరుద్ధంగా, ధనాత్మక చార్జ్ ఉన్న హిమోగ్లోబిన్ కాథోడ్ వైపు కదులుతుంది.

ఒక నిర్దిష్ట వోల్టేజ్ కింద మరియు నిర్దిష్ట ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయం తర్వాత, వివిధ ఛార్జీలు మరియు పరమాణు బరువులు కలిగిన హిమోగ్లోబిన్‌లు వేర్వేరు వలస దిశలు మరియు వేగాలను ప్రదర్శిస్తాయి. ఇది విభిన్న మండలాలను వేరు చేయడానికి అనుమతిస్తుంది మరియు వివిధ హిమోగ్లోబిన్‌లను లెక్కించడానికి ఈ జోన్‌లపై తదుపరి రంగుమెట్రిక్ లేదా ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ స్కానింగ్ విశ్లేషణ చేయవచ్చు. సాధారణంగా ఉపయోగించే పద్ధతి pH 8.6 సెల్యులోజ్ అసిటేట్ మెమ్బ్రేన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్.

సైటోప్లాజంలో, గ్లైకోజెన్ లేదా పాలిసాకరైడ్ పదార్ధాలలో ఉండే ఇథిలీన్ గ్లైకాల్ సమూహాలు (CHOH-CHOH) (మ్యూకోపాలిసాకరైడ్‌లు, మ్యూకోప్రొటీన్లు, గ్లైకోప్రొటీన్లు, గ్లైకోలిపిడ్‌లు మొదలైనవి) ఆవర్తన ఆమ్లం ద్వారా ఆక్సీకరణం చెంది ఆల్డిహైడ్ గ్రూపులుగా (CHO-CHO) మార్చబడతాయి. ఈ ఆల్డిహైడ్ సమూహాలు రంగులేని ఊదా-ఎరుపు షిఫ్ రియాజెంట్‌తో కలిసిపోయి, కణంలో పాలీశాకరైడ్‌లు ఉన్న చోట నిక్షిప్తం చేసే ఊదా-ఎరుపు రంగును ఏర్పరుస్తాయి. ఈ ప్రతిచర్యను పీరియాడిక్ యాసిడ్-స్కిఫ్ (PAS) స్టెయినింగ్ అని పిలుస్తారు, దీనిని గతంలో గ్లైకోజెన్ స్టెయినింగ్ అని పిలుస్తారు.

ప్రయోగ పద్ధతి

మెటీరియల్స్:సెల్యులోజ్ అసిటేట్మెమ్బ్రేన్, ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ఉపకరణం(DYCP-38C మరియు విద్యుత్ సరఫరా DYY-6C), ఉన్నతమైన నమూనా లోడింగ్ సాధనం(పైపెట్), స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్, కలర్మెట్రిక్ క్యూవెట్‌లు, బఫర్లు.

బఫర్:

(1) pH 8.6 TEB బఫర్: బరువు 10.29 గ్రా ట్రైస్, 0.6 గ్రా ఇడిటిఎ, 3.2 గ్రా బోరిక్ యాసిడ్, మరియు 1000 మి.లీ.కి స్వేదనజలం జోడించండి.

(2) బోరేట్ బఫర్: బరువు 6.87 గ్రా బోరాక్స్ మరియు 5.56 గ్రా బోరిక్ యాసిడ్, మరియు 1000 ml కు స్వేదనజలం జోడించండి.

విధానం:

Pహిమోగ్లోబిన్ సొల్యూషన్ యొక్క పరిహారం

హెపారిన్ లేదా సోడియం సిట్రేట్ కలిగిన 3 ml రక్తాన్ని ప్రతిస్కందకంగా తీసుకోండి. 10 నిమిషాల పాటు 2000 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, ప్లాస్మాను విస్మరించండి. ఎర్ర రక్త కణాలను ఫిజియోలాజికల్ సెలైన్‌తో మూడుసార్లు కడగాలి (750 rpm, ప్రతిసారీ 5 నిమిషాల సెంట్రిఫ్యూగేషన్). 10 నిమిషాల పాటు 2200 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, సూపర్‌నాటెంట్‌ను విస్మరించండి. సమాన మొత్తంలో స్వేదనజలం జోడించండి, ఆపై కార్బన్ టెట్రాక్లోరైడ్ వాల్యూమ్ కంటే 0.5 రెట్లు జోడించండి. తర్వాత ఉపయోగం కోసం ఎగువ Hb ద్రావణాన్ని సేకరించడానికి 5 నిమిషాల పాటు తీవ్రంగా షేక్ చేసి, ఆపై 2200 rpm వద్ద 10 నిమిషాల పాటు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి.

మెంబ్రేన్‌ను నానబెట్టడం

సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొరను 3 సెం.మీ × 8 సెం.మీ పరిమాణంలో స్ట్రిప్స్‌గా కత్తిరించండి. వాటిని పూర్తిగా సంతృప్తమయ్యే వరకు pH 8.6 TEB బఫర్‌లో నానబెట్టండి, ఆపై తీసివేసి, ఫిల్టర్ పేపర్‌తో పొడిగా తుడవండి.

గుర్తించడం

10 μl హిమోగ్లోబిన్ ద్రావణాన్ని నిలువుగా సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొరపై (గరుకైన వైపు) గుర్తించడానికి పైపెట్‌ను ఉపయోగించండి, అంచు నుండి 1.5 సెం.మీ.

ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్

బోరేట్ బఫర్ ద్రావణాన్ని ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ చాంబర్‌లో పోయాలి. సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొరను ఛాంబర్ యొక్క కాథోడ్ చివర మచ్చల వైపు ఉంచండి. 30 నిమిషాల పాటు 200 V వద్ద అమలు చేయండి.

ఎలుషన్

HbA మరియు HbA2 జోన్‌లను కత్తిరించండి, వాటిని ప్రత్యేక పరీక్ష ట్యూబ్‌లలో ఉంచండి మరియు వరుసగా 15 ml మరియు 3 ml స్వేదనజలం జోడించండి. హిమోగ్లోబిన్‌ను పూర్తిగా ఎలిట్ చేయడానికి శాంతముగా షేక్ చేయండి, ఆపై కలపండి.

కలర్మెట్రీ

ఎల్యూషన్ ద్రావణం కోసం స్వేదనజలం ఉపయోగించి శోషణను సున్నా చేయండి మరియు 415 nm వద్ద శోషణను కొలవండి.

గణన

HbA2(%) = HbA2 ట్యూబ్ యొక్క శోషణ / (HbA ట్యూబ్ యొక్క శోషణ × 5 + HbA2 ట్యూబ్ యొక్క శోషణ) × 100%

ప్రయోగాత్మక ఫలితాల గణన

pH 8.6 TEB బఫర్ సెల్యులోజ్ అసిటేట్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ కోసం సూచన పరిధి: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

గమనికలు

ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయం చాలా పొడవుగా ఉండకూడదు. ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ సమయంలో సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొర పొడిగా ఉండకూడదు. HbA మరియు HbA2 స్పష్టంగా వేరు చేయబడినప్పుడు ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌ను ఆపండి. దీర్ఘకాలిక ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ బ్యాండ్ వ్యాప్తి మరియు అస్పష్టతకు కారణమవుతుంది.

చాలా నమూనాను ఉపయోగించడం మానుకోండి. అధిక హిమోగ్లోబిన్ లిక్విడ్ బ్యాండ్ డిటాచ్‌మెంట్ లేదా తగినంత మరకకు దారితీయవచ్చు, ఫలితంగా HbA స్థాయిలు తప్పుగా పెరుగుతాయి.

ప్రోటీన్లతో సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొర కలుషితం కాకుండా నిరోధించండి.

కరెంట్ చాలా ఎక్కువగా ఉండకూడదు; లేకుంటే, హిమోగ్లోబిన్ బ్యాండ్‌లు విడిపోకపోవచ్చు.

ఎల్లప్పుడూ సాధారణ వ్యక్తుల నుండి నమూనాలను మరియు అవసరమైన అసాధారణ హిమోగ్లోబిన్‌లను నియంత్రణలుగా చేర్చండి.

బీజింగ్ లియుయి బయోటెక్నాలజీ హీమోగ్లోబిన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ కోసం ప్రొఫెషనల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ట్యాంక్‌ను తయారు చేస్తుంది.DYCP-38Cసెల్యులోజ్ అసిటేట్ మెమ్బ్రేన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ట్యాంక్, మరియు సెల్యులోజ్ అసిటేట్ మెమ్బ్రేన్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ట్యాంక్ కోసం ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ విద్యుత్ సరఫరా యొక్క రెండు నమూనాలు అందుబాటులో ఉన్నాయి.DYY-2CమరియుDYY-6Cవిద్యుత్ సరఫరా.

ఇంతలో, బీజింగ్ లియుయి బయోటెక్నాలజీ వినియోగదారుల కోసం సెల్యులోజ్ అసిటేట్ పొరను అందిస్తుంది మరియు సెల్యులోజ్ అసిటేట్ మెమ్బ్రేన్ పరిమాణాన్ని అనుకూలీకరించవచ్చు. నమూనాలు మరియు మరింత సమాచారం కోసం మమ్మల్ని అడగడానికి స్వాగతం.

బీజింగ్ లియుయి బ్రాండ్ చైనాలో 50 సంవత్సరాల కంటే ఎక్కువ చరిత్రను కలిగి ఉంది మరియు కంపెనీ ప్రపంచవ్యాప్తంగా స్థిరమైన మరియు అధిక-నాణ్యత ఉత్పత్తులను అందించగలదు. సంవత్సరాల అభివృద్ధి ద్వారా, ఇది మీ ఎంపికకు అర్హమైనది!

మేము ఇప్పుడు భాగస్వాముల కోసం వెతుకుతున్నాము, OEM ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ట్యాంక్ మరియు పంపిణీదారులు ఇద్దరూ స్వాగతించబడ్డారు.

మీరు మా ఉత్పత్తుల కోసం ఏదైనా కొనుగోలు ప్రణాళికను కలిగి ఉంటే, దయచేసి మమ్మల్ని సంప్రదించడానికి సంకోచించకండి. మీరు ఇమెయిల్‌లో మాకు సందేశాన్ని పంపవచ్చు[ఇమెయిల్ రక్షించబడింది]లేదా[ఇమెయిల్ రక్షించబడింది], లేదా దయచేసి మాకు +86 15810650221కి కాల్ చేయండి లేదా Whatsapp +86 15810650221 లేదా Wechatని జోడించండి: 15810650221